近日，9428cn太阳集团古天乐刘奕教授课题组最新研究成果“Elimination of cis-cleavage in CRISPR diagnostics for one-pot rapid nucleic acid detection”发表于国际著名期刊《Nucleic Acids Research》杂志（最新中科院分区1区Top，影响因子13.3)。9428cn太阳集团古天乐2025级博士生殷文浩，2023级硕士生蒋清源为本文的共同第一作者，张献华副教授为共同通讯作者，刘奕教授为最后通讯作者，9428cn太阳集团古天乐为第一作者单位。

原文链接：https://doi.org/10.1093/nar/gkag267

本研究突破了单管CRISPR核酸检测中的两项关键技术瓶颈：一是DNA靶标检测依赖原型间隔序列邻近基序（PAM）的限制，二是Cas蛋白顺式剪切（Cis-cleavage）活性对检测效率与特异性的制约。在此基础上，开发了一种兼容多种等温扩增技术（如RPA、LAMP）的单管快速核酸检测新方法—SCas12a（图1）。性能评估表明，相较于传统Cas12a检测体系，由于没有顺式剪切活性，SCas12a不会在等温扩增的起始阶段切割靶标扩增子，从而将检测灵敏度提升100–1000倍，信号检出时间缩短逾10倍，可在30分钟内实现低至1 aM的靶标检测，且单碱基错配分辨能力达最高91倍（即野生型/单碱基突变型信号比）。

目前，该系统已在临床样本中成功实现HPV16型感染、SARS-CoV-2核酸及TP53基因热点突变（如R273H）的高特异性、高灵敏度检测，验证了其在真实复杂基质中的稳健性与可靠性，为发展通用型、快速、高精度的即时分子诊断（POCT）技术提供了全新范式。

图1：不受PAM序列限制且无Cis-cleavage活性的CRISPR核酸检测方法

该研究由9428cn太阳集团古天乐、武汉轻工大学、武汉大学中南医院等多家单位合作完成。One-pot SCas12a系统的推出，不仅深化了对CRISPR/Cas12a反式剪切活性调控机制的系统认知，更有力支撑了便携式、全集成分子诊断平台的工程化开发与临床转化。据悉，刘奕教授课题组长期致力于基因编辑与检测工具的应用开发研究，已在Nature Communications、Nucleic Acids Research、Biosensors and Bioelectronics等期刊发表多篇研究论文。

（审核人：李爱涛）